填料主要以硅胶为基质，，在其外貌键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，，其它常用的反相柱尚有C8、C4、C2和苯基柱等。。另外尚有离子交流柱，，GPC柱，，聚合物填料柱等。。
反相色谱柱举行样品剖析时：
1确保流动相清洁，，每隔24-48小时就应新配水相流动相，，并同时替换或仔细洗濯流动相溶剂瓶，，以阻止流动相长菌。。确保实验室纯水系统事情正常。。
2确保样品不含颗粒型杂质。。如样品过脏，，或有微粒保存，，需要思量适合的样品制备要领。。在使用样品过滤器时，，确保滤膜为0.22μm，，且与样品溶剂*兼容（不爆发消融）。。也可思量使用高速离心法去除颗粒性杂质，，例如8000rpm转速以上离心20分钟后，，移取样品上清液进样。。
3确保样品溶液与流动相条件兼容，，进样后不会爆发沉淀、或溶剂不互溶情形。。通常使用流动相或比流动相洗脱强度弱的溶液(即有机溶剂比例较低)消融或稀释样品，，这样可以获得的峰形和检测迅速度。。
4如系统在线混淆天生流动相，，预先检查流动相各组分的兼容性。。例如，，当磷酸盐缓冲液与高浓度乙腈（例如≥70%）混用时，，可能爆发盐析出。。
5相识色谱柱的操作使用限度。。若是所使用的流动相条件、柱温、以及样品溶液条件，，倒运于色谱柱寿命时，，请使用保�；；；；ぶ匝由熘倜�。
6在使用流动相举行柱平衡之前，，若是流动相中含有可能析出的缓冲盐，，先使用5倍柱体积的有机溶剂-水溶液举行过渡。。例如，，在使用40/60甲醇/磷酸盐缓冲液流动相之前，，先使用5倍柱体积的40/60甲醇/纯水溶液冲洗色谱柱。。
7在通例剖析历程中，，每针或距离若干针洗濯柱内可能积累的污染物。。完身剖析后，，*洗濯色谱柱，，除去柱内缓冲盐和污染物。。
8在反相色谱柱使用历程中，，按期举行柱效测试，，纪录塔板数与压力，，从而追踪监控色谱柱的性能转变。。柱效测试要领应牢靠。。
9反相色谱柱应生涯于合适的高比例或100%有机相（如乙腈或甲醇）中。。如色谱柱使用于高温或PH条件，，或停用色谱柱凌驾72小时，，用100%乙腈生涯色谱柱。。
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