反相色谱柱是指使用非极性的反相介质为牢靠相，，，，极性有机溶剂的水溶液为流动相，，，，凭证溶质极性(疏水性)的差别举行溶质疏散与纯化的洗脱色谱法
。。。与HIC一样，，，，RPC中溶质也通过疏水性相互作用分派于牢靠相外貌，，，，可是，，，，RPC牢靠相外貌*被非极性基团所笼罩，，，，体现出强烈的疏水性
。。。因此，，，，必需用极性有机溶剂(如甲醇、乙腈等)或其水溶液举行溶质的洗脱疏散
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　　溶质在反相介质上的分派系数取决于溶质的疏水性，，，，一样平常疏水性越大，，，，分派系数越大
。。。当牢靠相一准时，，，，可以通过调理流动相的组成调解溶质的分派系数
。。。RPC主要应用于相对分子质量低于5000，，，，特殊是1000以下的非极性小分子物质的剖析和纯化，，，，也可以用于卵白质等生物大分子的剖析和纯化
。。。由于反相介质外貌为强烈疏水性，，，，并且流动相为低极性的有机溶剂，，，，生物活性大分子在RPC疏散历程中容易变性失活，，，，以是，，，，以接纳生物活性卵白质为目的时，，，，应注重选用相宜的反相介质
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　　反相介质的商品种类繁多，，，，其中醉具代表性的是以硅胶为载体，，，，通过外貌键合非极性分子层制备
。。。通过控制反应时间和温度，，，，可获得性能稳固的反相介质
。。。在硅胶基质的反相填料中，，，，以键合有C18、C8、C2的球形多孔填料醉为常见，，，，用途醉广
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　　RPC牢靠相大多是硅胶外貌键合疏水基团，，，，基于样品中的差别组分和疏水基团之间疏水作用的差别而疏散
。。。在生物大分子疏散中，，，，多接纳离子强度较低的酸性水溶液，，，，添加一定量乙腈、异丙醇或甲醇等与水互溶的有机溶剂作为流动相
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