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丁基疏水色谱柱在使用时有哪些需要注重的呢?????

更新时间:2020-09-21浏览:1625次
   丁基疏水色谱柱是一款以粒径为2.5 um的,,,,丁基键合无孔型亲水性聚合物基质为填充剂的疏水作用色谱柱。 。。适用于卵白质、单抗、酶等生物大分子的疏散剖析。 。。
  丁基疏水色谱柱的使用注重事项:
  1、使用新鲜清洁的水与乙腈。 。。冲洗系统,,,,确保系统清洁,,,,不含任何缓冲盐和污染物。 。。
  2、取用色谱柱时阻止磕碰掉落。 。。
  3、将丁基疏水色谱柱入口端毗连到系统上,,,,柱出口端先不要毗连,,,,色谱柱身上有箭头标明准确流向。 。。
  4、在0.1mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,,,,然后在2分钟内将流速升至0.5mL/min。 。。
  5、当溶剂匀称的从柱出口端流出,,,,停流速,,,,将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以阻止气泡进入检测系统,,,,并且可快速抵达基线平衡)。 。。
  6、重启流速,,,,凭证办法4的要领逐渐提高流速,,,,至通例剖析时所使用的流速。 。。
  7、参考柱效测试报告中的要领,,,,使用该流动相条件平衡色谱柱,,,,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,,,,直至压力与基线稳固。 。。
  8、测试丁基疏水色谱柱柱效。 。。若是没有柱效测试报告中的剖析物,,,,请厂家部分追求支持,,,,使用合适的浓度与进样量。 。。柱效效果略低于柱效测试报告属正常情形。 。。如效果显着偏低、峰形拖尾,,,,提醒色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,,,,需要举行故障排查。 。。当使用2.1mm内径色谱柱时,,,,建议优化系统以镌汰谱带展宽,,,,包括:使用检测器微量流通池,,,,镌汰进样器loop环体积,,,,使用较小内径(如0.005''或0.12mm)的系统管路。 。。并确保管路与丁基疏水色谱柱毗连适当、无死体积。 。。当使用小颗粒填料(如2.5μm)短柱举行快速疏散时,,,,需要思量以下因素:
  1、确保管路丁基疏水色谱柱毗连适当、无死体积,,,,只管优化系统镌汰谱带展宽;;;;;
  2、提高采样频率至10点/秒以上;;;;;
  3、较小粒径的色谱柱爆发的柱压较高,,,,而较小粒径要抵达*色谱效率所需的线速率较高,,,,请凭证所用LC系统的现真相形调理流速;;;;;
  4、可使用较高的柱温来赔偿小颗粒造成的压力升高,,,,例如40?C。 。。使用杂化颗粒反相色谱柱时,,,,可使用45?C或更高。 。。
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