反相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、讨论、螺丝等组成 。 。。柱管多用不锈钢制成，，，，压力不高于70 kg/cm2 时，，，，也可接纳厚壁玻璃或石英管，，，，管内壁要求有很高的光洁度 。 。。为提高柱效，，，，减小管壁效应，，，，不锈钢柱内壁多经由抛光 。 。。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，，，，其效果与抛光相同 。 。�；；；Ｉ杏惺褂萌廴诠杌虿ＡС睦锏�，，，，用于细管柱 。 。。色谱柱两头的柱讨论内装有筛板，，，，是烧结不锈钢或钛合金，，，，孔径0.2~20μm（5~10&μm），，，，取决于填料粒度，，，，目的是避免填料漏出 。 。。
反相色谱柱的影响因素：
(1)柱长
有机小分子和肽类的区分率随柱长的增添而增添．可是柱长增添并不可使卵白质和核酸等生物大分子的区分率显着增添．它们在较短的柱子上往往也有很好的疏散效果 。 。。
(2)流动相的流速 。 。。
有机小分子和肽类的区分率对流动相流速很是敏感 。 。。而卵白质和核酸等生物大分子的区分率则不然 。 。。流速越小，，，，柱子越长，，，，色谱峰的宽度就越大，，，，区分率就越小 。 。。制备色谱上样历程中的流速对动态吸附容量影响很大 。 。。
(3)温度 。 。。
温度上升，，，，流动相黏度下降，，，，流动速率加速，，，，且流动相与牢靠相之间的传质速率加速，，，，使区分率增添 。 。。同时，，，，温度上升，，，，分子热运动增添，，，，疏水性作用削弱 。 。。升高温度要思量目的物质的热稳固性 。 。。
(4)流动相组成 。 。。
流动相的极性越大，，，，溶质的分派系数越大，，，，洗脱时间越短 。 。。RPC多接纳降低流动相极性(水含量)的线性梯度洗脱法 。 。。水是极性zui强的溶剂，，，，在反相色谱中经常和基础溶剂配合使用，，，，向流动相中加入差别浓度的、可以与水混溶的有机溶剂，，，，以获得差别强度的流动相，，，，这些有机溶剂称为修饰剂 。 。。反相色谱中zui常用的有机溶剂有甲醇和乙腈 。 。。别的，，，，乙醇、四氢呋喃、异丙醇及二氧六环也常被用作修饰剂 。 。。有机溶剂梯度的巨细也会影响区分率，，，，一样平常梯度越� 。 。。致试酱� 。 。。
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