层析柱是凝胶层析手艺中的主体
，
，，，一样平常用玻璃管或有机玻璃管。。。。
。凭证样品混淆物中各组分在牢靠相和流动相中分派系数差别
，
，，，从而疏散的一种层析法。。。。
。层析柱的直径巨细不影响疏散度
，
，，，样品用量大
，
，，，可加大柱的直径
，
，，，一样平常制备用凝胶柱
，
，，，直径大于2厘米
，
，，，但在加样时应将样品匀称漫衍于凝胶柱床面上。。。。
。

　　层析柱详细的操作要领：

　　以中压柱层析法提取疏散冬凌草甲素为例

　　1、吸附剂的处置惩罚及柱子装填

　　将一定量薄层层析硅胶装人搪瓷盘置于烘箱中
，
，，，于105C活化2H后
，
，，，取出安排室温即可装柱。。。。
。柱子接纳干法填充
，
，，，填满整个柱体
，
，，，不留死体积
，
，，，密封后用柱塞式计量溶剂泵按丙酮一石油醚(5:95)比例泵人溶剂
，
，，，至溶剂流出止。。。。
。

　　2、上样

　　将冬凌草的乙醇提取物400G用适量丙酮消融
，
，，，泵人中压柱柱头
，
，，，然后泵人石油醚1000RID。。。。
。

　　3、洗脱

　　以一定比例的石油醚一丙酮为洗脱液
，
，，，60ML/MIN的流速举行梯度洗脱
，
，，，柱的使用压力为2~3KG/C。。。。
。按每份500ML网络
，
，，，TLC检识睁开剂丙酮一氯(2:8)
，
，，，显色剂5%香草醛浓硫酸乙醇液

　　至洗脱*
，
，，，相同流份合并
，
，，，接纳溶剂。。。。
。将冬凌草甲素流份合并蒸干。。。。
。加人适量甲醇热溶后自然安排
，
，，，析出结晶
，
，，，为冬凌草甲素。。。。
。

　　4、层析柱再生、平衡

　　有用因素经TLC检识所有流出后
，
，，，用纯丙酮5000ML再生
，
，，，丙酮一石油醚(5:95)平衡后
，
，，，可再次上样
，
，，，重复使用(使用次数随质料差别而异
，
，，，一样平常可一连使用2-6个月以上)。。。。
。

　　5、重结晶

　　冬凌草甲素结晶析出*后
，
，，，减压过滤
，
，，，然后用少量甲醇洗涤(洗涤液保存
，
，，，作下次热溶冬凌草甲素用)。。。。
。将冬凌草甲素再用适量甲醇热溶后安排
，
，，，结晶再次析出
，
，，，待结晶*后
，
，，，抽滤
，
，，，用少量洗涤
，
，，，将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中
，
，，，35度真空干燥至恒重。。。。
。密封于瓶中
，
，，，置干燥器中生涯。。。。
。

　　6、薄层层析剖析

　　取适量冬凌草甲素比照品及由上述要领获得的冬凌草甲素样品甲醇消融后点于统一硅胶G薄层板上
，
，，，以氯一丙酮(8:2)为睁开剂举行睁开
，
，，，5%香草醛浓硫酸乙醇液显色
，
，，，于105。。。。
。C烘至黑点清晰。。。。
。批注在该睁开系统下
，
，，，冬凌草甲素样品和比照品都具有相同的RF值
，
，，，并泛起出同样的蓝绿色黑点
，
，，，在制备的冬凌草甲素样品中
，
，，，没有杂质斑痕。。。。
。