丁基疏水色谱柱是一款以粒径为2.5um的,,,,丁基键合无孔型亲水性聚合物基质为填充剂的疏水作用色谱柱。。。适用于卵白质、单抗、酶等生物大分子的疏散剖析。。。由于和药物清静以及生产本钱息息相关,,,,关于重组卵白药物(包括单抗)的非均一性剖析变得越来越被重视。。。TSKgelButyl-NPR(4.6mmIDX3.5cm)已经上市凌驾20年了,,,,它以对卵白的高速、高区分率的疏散性能为宽大客户提供了资助。。。新上市的Butyl-NPR(4.6mmIDX10cm)色谱柱具有更高的区分率,,,,可以知足生物制药的研究职员关于HPLC色谱柱的区分率和疏散选择性的更高要求。。。
接纳具有适度疏水性的填料,,,,以含盐水溶液作流动相,,,,借助于溶质与牢靠相间的疏水相互作用实现疏散的色谱要领。。。其保存机理与反相色谱基内情同,,,,所差别的是其牢靠相的疏水性不如反相牢靠相强,,,,多为低密度漫衍的甲基、乙基、丙基、丁基和苯基等。。。疏水作用色谱主要用于卵白质的疏散与纯化。。。
丁基疏水色谱柱的使用注重事项:
1、使用新鲜清洁的水与乙腈。。。冲洗系统,,,,确保系统清洁,,,,不含任何缓冲盐和污染物。。。
2、取用色谱柱时阻止磕碰掉落。。。
3、将丁基疏水色谱柱入口端毗连到系统上,,,,柱出口端先不要毗连,,,,色谱柱身上有箭头标明准确流向。。。
4、在0.1mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱,,,,然后在2分钟内将流速升至0.5mL/min。。。
5、当溶剂匀称的从柱出口端流出,,,,停流速,,,,将色谱柱出口端接到系统检测器上(这样可以阻止气泡进入检测系统,,,,并且可快速抵达基线平衡)。。。
6、重启流速,,,,凭证办法4的要领逐渐提高流速,,,,至通例剖析时所使用的流速。。。
7、参考柱效测试报告中的要领,,,,使用该流动相条件平衡色谱柱,,,,通常需要使用5-10倍柱体积的流动相,,,,直至压力与基线稳固。。。
8、测试丁基疏水色谱柱柱效。。。若是没有柱效测试报告中的剖析物,,,,请厂家部分追求支持,,,,使用合适的浓度与进样量。。。柱效效果略低于柱效测试报告属正常情形。。。如效果显着偏低、峰形拖尾,,,,提醒色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态,,,,需要举行故障排查。。。当使用2.1mm内径色谱柱时,,,,建议优化系统以镌汰谱带展宽,,,,包括:使用检测器微量流通池,,,,镌汰进样器loop环体积,,,,使用较小内径(如0.005''或0.12mm)的系统管路。。。并确保管路与丁基疏水色谱柱毗连适当、无死体积。。。当使用小颗粒填料(如2.5μm)短柱举行快速疏散时,,,,需要思量以下因素:
1、确保管路丁基疏水色谱柱毗连适当、无死体积,,,,只管优化系统镌汰谱带展宽;;;;;
2、提高采样频率至10点/秒以上;;;;;
3、较小粒径的色谱柱爆发的柱压较高,,,,而较小粒径要抵达*色谱效率所需的线速率较高,,,,请凭证所用LC系统的现真相形调理流速;;;;;
4、可使用较高的柱温来赔偿小颗粒造成的压力升高,,,,例如40?C。。。使用杂化颗粒反相色谱柱时,,,,可使用45?C或更高。。。