反相柱填料主要以硅胶为基质， ，，，在其外貌键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱， ，，，其它常用的反相柱尚有C8,C4,C2和苯基柱等。。。。另外尚有离子交流柱， ，，，GPC柱， ，，，聚合物填料柱等。。。。
一、反相色谱柱的选择
1.柱子的PH值使用规模
反相柱优点是牢靠相稳固， ，，，应用普遍， ，，，可使用多种溶剂。。。。但硅胶为基质的填料， ，，，使用时一定要注重流动相的PH规模。。。。一样平常的C18柱PH值规模都在2-8， ，，，流动相的PH值小于2时， ，，，会导致键合相的水解；；；；当PH值大于7时硅胶易消融；；；；经常使用缓冲液牢靠相要降解。。。。一旦爆发上述情形， ，，，色谱柱生齿处会塌陷。。。。同样填料州差别牌号的色谱柱不尽相同。。。。若是流动相PH较高或经常使用缓冲液时， ，，，建议选择PH规模大的柱子， ，，，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。。。。
2.填料的端基封尾（或称封口）
把填料的剩余硅羟基接纳封口手艺举行端基封尾， ，，，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；；；；含碳量增高了， ，，，有利于不易保存化合物的疏散；；；；填料稳固性好了， ，，，组分的保存时间重现性就好。。。。若是待剖析的样品属酸性或碱性的化合物， ，，，选用填料经端基封尾的色谱柱。。。。
二、液相色谱柱的使用
色谱柱在使用前， ，，，举行柱的性能测试， ，，，并将效果生涯起来， ，，，作为以后评价柱性能转变的参考。。。。在做柱性能测试时要凭证色谱柱出厂报告中的条件举行（出厂测试所使用的条件是*条件）， ，，，只有这样， ，，，测得的效果才有可比性。。。。但要注重：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差别而有所差别。。。。
1、样品的前处置惩罚
a、使用流动相消融样品。。。。
b、使用预处置惩罚柱除去样品中的强极性或与柱填料爆发不 可逆吸附的杂质。。。。
c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。。。。
2、流动相的配制
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交流而抵达疏散的目的， ，，，因此要求流动相具备以下的特点：
a、流动相对样品具有一定的消融能力， ，，，包管样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保保存柱中）。。。。
b、流动相与样品不爆发化学反应
c、流动相的黏度要只管小！！！， ，，，以便获得好的疏散效果；；；；降低柱压降， ，，，延伸泵的使用寿命（可运用提高温度的要领降低流动相的黏度）。。。。
d、流动相的物化性子要与使用的检测器相顺应。。。。如使用UV检测器， ，，，使用对紫外吸收较低的溶剂配制。。。。
e、流动相沸点不要太低， ，，，不然容易爆发气泡， ，，，导致实验无法举行。。。。
f、在流动相配制好后， ，，，一定要举行脱气。。。。除去消融在流动相中的微量气体既有利于检测， ，，，还可以避免流动相中的微量氧与样品爆发作用。。。。
3、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数， ，，，使用差别的流速可获得差别的柱效。。。。关于一根特定的色谱柱， ，，，要追求*柱效， ，，，使用*流速。。。。对内径为4.6mm的色谱柱， ，，，流速一样平常选择1ml／min， ，，，关于内径为4.0mm柱， ，，，流速0.8ml／min为佳。。。。
中选用*流速时， ，，，剖析时间可能延伸。。。�？？山幽筛谋淞鞫嗟南吹忧慷鹊囊煲运醵唐饰鍪奔洌ㄈ缡褂梅聪嘀保� ，，，可适当增添甲醇或乙腈的含量）。。。。
注重：
a.含水流动相在实验前配制， ，，，尤其是炎天使用缓冲 溶液作为流动相不要住宿。。。。加入*， ，，，避免细菌生长。。。。
b.流动相要求使用0.45 μm滤膜过滤， ，，，除去微粒杂质。。。。
c.使用HPLC级溶剂配制流动相， ，，，使用合适的流动相可延伸色谱柱的使用寿命， ，，，提高柱性能。。。。
f.氯化物的溶剂对其有一定的侵蚀性， ，，，故使用时要注重， ，，，柱及毗连受内不可长时间存留此类溶剂， ，，，以阻止侵蚀。。。。
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